实验操作 | 肿瘤细胞耐药性检测

前言：肿瘤耐药是临床肿瘤化疗中的常见现象，是困扰临床的重要难题和亟待解决的困境。耐药细胞株是研究肿瘤耐药的常用体外模型。目前对细胞耐药能力检测的最常用方法是检测细胞的 IC50 ( half maximal inhibitory concentration )。

# 实验原理

IC50 ，是指某一药物或者物质 (抑制剂) 在抑制某些生物程序 (或者是包含在此程序中的某些物质，比如酶，细胞受体或是微生物) 的 50% 量时的浓度。在凋亡方面，可以理解为一定浓度的某种药物诱导肿瘤细胞凋亡 50%，该浓度称为 50% 抑制浓度，即凋亡细胞与全部细胞数之比等于 50% 时所对应的浓度， IC50 值可以用来衡量药物诱导凋亡的能力，即诱导能力越强，该数值越低，即细胞对药物的耐受程度越低。通过比较细胞样本的 IC50 （可与敏感细胞或者亲本细胞比，也可与设计好的对照组比），即可评价该样本对药物的耐受能力。

# 实验目的

检测细胞样本的 IC50

# 实验材料

# 主要试剂

• 化疗药
• 目标细胞（可设置不同的分组）
• 培养基
• 胰酶等

# 主要仪器

• 超净台
• 二氧化碳培养箱
• 离心机
• 显微镜
• 酶标仪

# 实验步骤^[1][2]

1. 取对数生长期的细胞，接种于 96 孔板内，待细胞贴壁后，换上带有不同梯度浓度药物 的培养基（如 0.1，0.25，0.5，1，2，5，10 μM。若是浓度不确定，可先查阅文献， 获得一个大致的范围，在这个范围里设置梯度，第一轮，可以采取大倍数梯度稀释，如 10 倍，第二轮，小幅度梯度，如 2 倍倍比稀释或等差比例稀释。
2. 于不同的时间点检测细胞增殖情况。
3. 计算细胞的 IC50 。