前言:肿瘤耐药是临床肿瘤化疗中的常见现象,是困扰临床的重要难题和亟待解决的困境。耐药细胞株是研究肿瘤耐药的常用体外模型。目前对细胞耐药能力检测的最常用方法是检测细胞的 IC50
( half maximal inhibitory concentration
)。
# 实验原理
IC50
,是指某一药物或者物质 (抑制剂) 在抑制某些生物程序 (或者是包含在此程序中的某些物质,比如酶,细胞受体或是微生物) 的 50% 量时的浓度。在凋亡方面,可以理解为一定浓度的某种药物诱导肿瘤细胞凋亡 50%,该浓度称为 50% 抑制浓度,即凋亡细胞与全部细胞数之比等于 50% 时所对应的浓度, IC50
值可以用来衡量药物诱导凋亡的能力,即诱导能力越强,该数值越低,即细胞对药物的耐受程度越低。通过比较细胞样本的 IC50
(可与敏感细胞或者亲本细胞比,也可与设计好的对照组比),即可评价该样本对药物的耐受能力。
# 实验目的
检测细胞样本的 IC50
# 实验材料
# 主要试剂
- 化疗药
- 目标细胞(可设置不同的分组)
- 培养基
- 胰酶等
# 主要仪器
- 超净台
- 二氧化碳培养箱
- 离心机
- 显微镜
- 酶标仪
# 实验步骤[1][2]
- 取对数生长期的细胞,接种于 96 孔板内,待细胞贴壁后,换上带有不同梯度浓度药物 的培养基(如 0.1,0.25,0.5,1,2,5,10 μM。若是浓度不确定,可先查阅文献, 获得一个大致的范围,在这个范围里设置梯度,第一轮,可以采取大倍数梯度稀释,如 10 倍,第二轮,小幅度梯度,如 2 倍倍比稀释或等差比例稀释。
- 于不同的时间点检测细胞增殖情况。
- 计算细胞的
IC50
。
Pu Y, Zhao F, Wang H, et al. MiR-34a-5p promotes the multi-drug resistance of osteosarcoma by targeting the CD117 gene. Oncotarget 2016; 7(19): 28420-34. ↩︎
Zhao Z, Li J, Jiang Y, Xu W, Li X, Jing W. CLDN1 Increases Drug Resistance of Non-Small Cell Lung Cancer by Activating Autophagy via Up-Regulation of ULK1 Phosphorylation. Med Sci Monit 2017; 23: 2906-16. ↩︎