三元一组机制的通用思维导图
- 实验流程
- 准备阶段 1-2 月
- 动物、细胞、抗体、病毒、实验耗材的购买准备
- 相关实验方法的学习
- 2.2 单变量论证 5-6 月
- 【主变量】MDM4 促进 CRC 增殖、抑制 CRC 的铁死亡
- 2.2.2 表达差异论证 - 组织水平
- 收集临床样本
- 免疫组化、PCR、WB
- 数据库数据收集
- 2.2.3 临床相关性
- 基线表
- 单因素、多因素表
- 生存曲线图
- 2.2.4 表达差异验证 - 细胞水平
- 多个细胞系培养
- PCR、WB 检测
- 2.2.5 主变量调节表型 - 细胞实验
- 正反操作
- 表型检测
- 2.2.6 主变量调节表型 - 动物实验
- 2.3 二元变量论证：主变量与交互变量 7-8 月
- 【主变量】MDM4 与【交互变量】B 结合
- 2.3.1 交互变量筛选
- 质谱筛选交互变量
- 2.3.2 交互变量的二次筛选
- 若明确报道分子 B 调控铁死亡，跳过此步
- 2.3.3 共定位筛选交互变量
- 选做
- 2.3.4 交互作用验证
- 使用 CoIP 和 GST pulldown 两个不同手段
- 2.3.5 主变量与交互变量的调控作用
- 操作主变量，WB 检测 B 蛋白量变化
- 2.3.6 调控必要性的论证
- 如果主变量与交互变量之间存在调节关系，则必须完成调控必要性论证
- 2.3.7 结构必要性论证
- 外包完成
- 动物实验：依据细胞实验结果补充
- 2.4 二元变量论证：主变量与效应变量 2-3 月
- 【主变量】MDM4 调控结肠癌的铁死亡，依赖于【效应变量】C
- 2.4.1 效应变量的筛选
- 文献调研
- 尝试铁死亡明星分子
- 通路芯片
- 2.4.2 效应变量验证
- 2.4.3 回复实验
- 动物实验：待补充
- 三元一组交互必要性论证 2-3 月
- 【主变量】A 调节【效应变量】C 以及对细胞表型的影响，依赖于与【效应变量】B 的结合
- 2.5.1 必要性论证（减配）
- 过表达【主变量】MDM4，同时沉默【交互变量】B，检测【效应变量】C 和细胞表型的改变
- 动物实验：待补充
- 2.5.2 必要性论证（标配）
- 细胞实验：分别过表达结合位点缺失的 A，比较 A 与 B 的结合，以及【效应变量】C 和细胞表型的缺失
- 动物实验：待补充
